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平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨立的器官,而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官;在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運動和變形,也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。
小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。
小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織,長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng)。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性,鑒定純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
(1)儀器
儀器名稱 | 規(guī)格型號 | 廠家 |
生物安全柜 | BSC-1500ⅡA2-X | 濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司 |
CO2細胞培養(yǎng)箱 | BC-J160S | 上海博迅實業(yè)有限公司 |
熒光倒置顯微鏡 | DS-Ri2 | Nikon |
高速冷凍離心機 | Multifuge X1R | Thermo Fisher |
電熱恒溫鼓風干燥箱 | DHG-9123A | 上海精宏實驗設備有限公司 |
(2)試劑耗材
試劑名稱 | 規(guī)格/貨號 | 廠家 |
T25細胞培養(yǎng)瓶 | 430639 | Coming |
血球計數(shù)板 | Neubauer improved | Marienfeld |
細胞培養(yǎng)孔板 | WHB-24 | 上海臥宏生物科技有限公司 |
平滑肌細胞*培養(yǎng)基 | PriMed-iCell-004 | 鏡像綺點(上海)細胞技術(shù)有限公司 |
0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA) | 1734858 | Gibico |
2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)
1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,
2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,
3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,
4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,
5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,
6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,
7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打,
8) 過100目篩網(wǎng),收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,
9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。
除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關于其他細胞的分離方法,想要學習的小伙伴可以來鏡像綺點進行現(xiàn)場學習,如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購買相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養(yǎng)條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關工作人員。
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